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El virus de la fiebre aftosa (VFA) se diagnostica mediante pruebas de aislamiento del virus combinadas con ELISA de antígenos y, recientemente, RT-PCR de un solo paso. El uso de la RT-PCR fluorogénica está adquiriendo cada vez más importancia para la detección rápida del virus de la fiebre aftosa a partir de muestras clínicas que no pueden procesarse mediante las pruebas habituales de aislamiento del virus y ELISA de antígenos. La RT-PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) combina la transcripción inversa con la amplificación por PCR y la detección de la amplificación positiva utilizando sondas fluorescentes como la sonda TaqMan ®. En el presente estudio, se estandarizó y utilizó una qRT-PCR basada en una sonda TaqMan® para la detección del genoma del FMDV a partir de muestras clínicas que incluían secreciones nasales, plasma y fluidos esofagofaríngeos (muestras probang). La estandarización inicial se realizó utilizando diferentes diluciones seriadas de un aislado de FMDV OTNN 24/84 (106,8 TCID50) y 102 virus pudieron ser identificados utilizando el TaqMan® qRT-PCR. Los estándares de ARN se sintetizaron in vitro a partir de un plásmido que contenía 110 pares de bases de la región 3D de una cepa aislada de tipo O del virus de la fiebre aftosa. Se realizó una dilución seriada de diez veces del ARN y se utilizó como ARN estándar para generar curvas estándar.
Info autore
Il Dr. N.Vijayalakhsmi è professore assistente e HOD presso il Dipartimento di Tecnologia Alimentare del JNTUA College of Engineering Kalikiri.
